Domanda

Come posso garantire la vitalità cellulare durante il sorting e ci sono modi per migliorarla?

Risposta

I campioni dovrebbero essere mantenuti in un terreno ricco, il più adatto possibile alle cellule.

Per le cellule eucariotiche, è consigliabile aggiungere proteine sieriche, ma senza superare una concentrazione del 2–3%, poiché un alto contenuto sierico nel campione può compromettere la precisione del sorting.
Per le linee cellulari eucariotiche e le cellule aderenti, è raccomandata l’aggiunta di 0,5 mM di EDTA. Per cellule particolarmente adesive, la concentrazione può essere aumentata fino a 5 mM.
Per sorting in condizioni sterili, è consigliata l’aggiunta di antibiotici. Inoltre, può essere utile aggiungere 25 mM di HEPES a pH 7,0.

Le provette di raccolta dovrebbero contenere una concentrazione sierica elevata (30%), poiché questa verrà diluita dal fluido del flusso (sheath fluid) proveniente dalle gocce di sorting.

Processare le cellule subito dopo il sorting aiuta a mantenere la vitalità cellulare.