Microscopia Crioelettronica
“The beauty of science lies in the intricate complexities of the natural world.” (Dorothy Crowfoot Hodgkin)
Descrizione
Il laboratorio offre supporto allo stato dell’arte per la preparazione di campioni per la microscopia crioelettronica (cryo-EM) e per la successiva visualizzazione e raccolta dati sul criomicroscopio. Il campione viene vitrificato su supporti appositi (griglie) mediante l’uso di etano liquido e successivamente manipolato in azoto liquido. La tecnica non richiede colorazioni o fissazioni e si applica direttamente al campione in soluzione.
L’applicazione più rilevante della microscopia crioelettronica è la determinazione della struttura di macromolecole biologiche (proteine, acidi nucleici e relativi complessi) a risoluzione quasi-atomica: mediante l’acquisizione di centinaia di migliaia di proiezioni 2D della singola particella, è possibile ricostruirne la struttura tridimensionale con metodi computazionali (single particle analysis) con una risoluzione che può arrivare a 3 angstrom ed è possibile anche individuare la coesistenza di diverse conformazioni strutturali nel medesimo campione.
L’irruzione della microscopia crioelettronica ha rappresentato negli ultimi anni una rivoluzione nel campo della biologia strutturale e del drug discovery, affiancando e superando l’utilizzo della cristallografia ai raggi X e meritando il conferimento del Premio Nobel per la Chimica 2017 ai suoi sviluppatori J. Dubochet, J. Frank e R. Henderson.
La tecnica può anche essere utilizzata per realizzare direttamente imaging ad altissimo ingrandimento di nanostrutture di vario tipo in sospensione (vescicole, nanoparticelle).
Strumentazione
Software
| Nome | Descrizione | |
|---|---|---|
| TIA (Thermo Fisher Scientific) | Software per la visualizzazione di campioni sul detector Ceta | |
| EPU (Thermo Fisher Scientific) | Software per la visualizzazione di campioni, lo screening dettagliato e la gestione delle raccolte dati sul detector Falcon | link |
Tariffe
Il regolamento del Centro prevede l’applicazione di un tariffario per l’utilizzo delle strumentazioni:
INTERNI
La consultazione è riservata al personale dell’Ateneo: vai alla pagina riservata
ESTERNI
| Strumento/Servizio | Uso autonomo (tariffa oraria) | Con supporto del tecnico (tariffa oraria) |
|---|---|---|
| Glacios cryo-EM data collection * | non previsto | € 160,00 |
| Glacios cryo-EM screening | non previsto | € 186,00 |
| Vitrobot | non previsto | € 50,00 |
| Consumabili Vitrobot per 1 ora (4 grids) | non previsto | € 80,00 |
| Trattamenti particolari del campione, organizzazione e trattamento dei dati, redazione di rapporti | non previsto | € 100,00 |
* per analisi di singoli campioni che comportino un numero di ore superiore alle 24 verranno redatte offerte specifiche
ESTERNI CONVENZIONATI
| Strumento/Servizio | Uso autonomo (tariffa oraria) | Con supporto del tecnico (tariffa oraria) |
|---|---|---|
| Glacios Cryo EM data collection * | non previsto | € 146,30 |
| Glacios Cryo EM screening | non previsto | € 170,50 |
| Vitrobot | non previsto | € 46,20 |
| Consumabili Vitrobot per 1 ora (4 grids) | non previsto | € 80,00 |
| Trattamenti particolari del campione, organizzazione e trattamento dei dati, redazione di rapporti | non previsto | € 30,00 |
* per analisi di singoli campioni che comportino un numero di ore superiore alle 24 verranno redatte offerte specifiche
Pubblicazioni
FAQ e Protocolli
FAQ
Come può un ricercatore sapere se la microscopia crioelettronica può essere utile alle sue ricerche?
Come viene gestito l’accesso degli utenti? Siete aperti a utenti esterni?
Gli utenti interessati alla determinazione di strutture di macromolecole a risoluzione quasi-atomica (single particle analysis) vengono iscritti al calendario di gestione del Centro Grandi Strumenti (Agendo) e possono inserire le prenotazioni, che vengono poi validate dal tecnico responsabile; sono detti utenti SPA. Invece gli utenti interessati all’imaging di nanostrutture (utenti imaging) devono contattare direttamente il tecnico per le prenotazioni.
