Passaggi:

  1. I ricercatori, borsisti e utenti esterni che desiderano iniziare a utilizzare il servizio FACS devono contattare Samantha Solito per discutere l’uso dell’apparecchiatura prima di pianificare l’esperimento.
  2. Consultare le FAQ e la configurazione del FACS Aria III
  3. Fornire dettagli sui precedenti esperimenti, se già effettuati. Si consiglia vivamente di eseguire esperimenti preliminari per definire le procedure di colorazione e preparazione cellulare, piuttosto che farlo durante l’esperimento finale.
  4. Prenotazione sorting con assistenza. Molti fattori (inclusa la stabilità del campione, la necessità di pulizie extra pre-sorting e/o post-sorting, ecc.) possono influenzare il tempo richiesto. Decideremo insieme quanto tempo riservare per garantire che ci sia tempo sufficiente per separare il tuo campione. L’uso del BD FACSAria III sarà programmato attraverso il sistema di Agendo.
  5. Almeno due o tre giorni lavorativi prima dell’esperimento di sorting, contattare l’operatore per discutere tutti i dettagli dell’esperimento.
  6. Al momento dell’appuntamento, si prega di essere puntuali e di portare:
    • Sospensioni cellulari e controlli nei tubi FACS (tubi rotondi da 5 mL in polipropilene, sterili, con tappi o altri dispositivi di raccolta campioni, se applicabile) risospesi nel BUFFER DI RISOSPENSIONE. È obbligatorio filtrare i campioni immediatamente prima del sorting con filtri per cellule con dimensioni dei pori di 20–50 µm.
    • Tubi di raccolta etichettati contenenti (tubi rotondi da 5 mL in polipropilene, sterili, con tappi o altri dispositivi di raccolta campioni, se applicabile) con 1-2 mL (in base ai dispositivi di raccolta campioni) di BUFFER DI RACCOLTA.
    • Da 10 a 50 mL di buffer di risospensione (filtrato a 0,2 µm) e buffer di raccolta per diluire le cellule, se necessario.
  7. Verificare sempre con l’operatore che tutti i gate siano impostati correttamente e che le popolazioni da separare siano chiaramente identificate.

Composizione del Buffer di Risospensione:

  • PBS
  • 2% FBS o BSA
  • Antibiotici
  • 2 mM EDTA

Composizione del Buffer di Raccolta:

  • RPMI (o IMDM)
  • 30% FBS
  • Antibiotici
  • 2 mM EDTA
  • HEPES