Domanda

Perché è importante rimuovere le cellule morte nel sorting di cellule eucariotiche?

Risposta

Le cellule morte rappresentano un problema rilevante nella separazione cellulare.
In generale, se in una sospensione ci sono più del 10% di cellule morte, è necessario rimuoverle. Al di sotto di questa soglia, il sorting potrebbe risentirne negativamente.

I motivi principali per eliminare le cellule morte sono:

• Le cellule morte rilasciano DNA libero che può aggregare le cellule.
• Possono legarsi in modo aspecifico agli anticorpi, portando a falsi positivi.

Il primo problema può essere ridotto con l’aggiunta di DNasi I.
Nel secondo caso, il problema si aggrava soprattutto nelle separazioni mediate da anticorpi, perché le cellule morte non target possono comunque legarsi agli anticorpi, compromettendo la purezza.

La soluzione più efficace è rimuovere completamente le cellule morte o morenti con un passaggio di pre-separazione.