Domanda
Di quante cellule ho bisogno per la procedura di sorting?
Risposta
Per rispondere a questa domanda, sono necessarie le seguenti informazioni:
- Qual è la percentuale della popolazione cellulare da separare?
- Quante cellule ti servono dopo il sorting?
- Cosa è più importante: alta purezza o resa totale?
- Quanto sono fragili o grandi le cellule?
La durata della procedura di sorting dipende da tutti questi parametri.
Ecco un esempio:
Quante cellule devo preparare per ottenere 1×10⁶ cellule di una popolazione che rappresenta il 10% del campione?
1×10⁶ = 0,1 [10% della popolazione target] × 10×10⁶ cellule iniziali.
Tuttavia, la resa reale si aggira intorno all’80–90% di questo valore teorico.
Quindi, il numero iniziale di cellule dovrebbe essere:
10×10⁶ × 100 / [80–90] = 11–12,5×10⁶ cellule.
La resa può essere significativamente inferiore se le cellule sono di scarsa qualità (scarsa vitalità, aggregazione, ecc.) o se si richiede alta purezza.
Bisogna inoltre ricordare che anche che una parte delle cellule verrà consumata per impostare il sorter.
Se è la prima volta che si separa un campione, potrebbe essere necessario avere più cellule rispetto agli esperimenti successivi.